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    小鼠檢測試劑盒的樣品稀釋和試劑準備方法

    點擊次數:27發布時間:2022-07-20
     
      小鼠檢測試劑盒的樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應后,PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應;經過PBS或TBS的徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠CD48呈正相關。
     
      小鼠檢測試劑盒的樣品稀釋:
     
      用戶須估計樣品待測因子的含量,決定適當的稀釋倍數,以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的最佳檢測范圍。根據待測因子含量高、中、低的不同,分別采取不同的稀釋方案,以下方案僅供參考,樣品的稀釋應有詳細記錄。
     
      高:指待測因子在40~400ng/ml。一般按1:100稀釋。297μL樣品稀釋液加3μL樣品。
     
      中:指待測因子在4~40ng/ml。一般按1:10稀釋。225μL樣品稀釋液加25μL樣品。
     
      低:指待測因子在62.5~4000pg/ml。按1:2稀釋。100μL樣品稀釋液加100μL樣品。
     
      特低:指待測因子≤62.5pg/ml。樣品一般不做稀釋,或按1:2稀釋。
     
      小鼠檢測試劑盒的試劑準備:
     
      小鼠標準品的稀釋和使用:在使用前2小時內準備。試劑盒提供2管標準品,每管10ng,每次使用1管。
     
      配制10,000pg/ml標準品:取1mL樣品稀釋液加入標準品管內,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動以助溶解。
     
      配制4000pg/ml標準品:取0.4mL10,000pg/ml的標準品加入有0.6mL樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻,做上標記。
     
      配制2000pg/ml~62.5pg/ml標準品:準備6只Eppendorf管,每管加0.3mL樣品稀釋液,分別標記上2000pg/m,1000pg/ml,500pg/ml,250pg/ml,125pg/ml,62.5pg/ml。取0.3mL4000pg/ml的標準品加入標記2000pg/ml的管中,混勻后同樣取出0.3mL,加入下一只管中。余同此類推,直到最后一只樣品管。
     
      注意:已經稀釋的標準品(10,000pg/ml),應在12小時內使用。-20℃冷凍保存條件下,2天內可以使用,但不得反復凍融。
     
      生物素標記抗小鼠CD48抗體工作液:在使用前2小時內準備。
     
      根據每孔需要100μL計算總的用量(實際配制時應多配制100~200μL)。
     
      按1μL生物素標記抗小鼠CD48加抗體稀釋液99μL的比例配制工作液。輕輕混勻。
     
      親和素-過氧化物酶復合物(ABC)工作液的準備:在使用前1小時內準備。
     
      根據每孔需要100μL計算總的用量(實配時應多配制100~200μL)。
     
      按1μL親和素-過氧化物酶復合物(ABC)加ABC稀釋液99μL的比例配制工作液。輕輕混勻。
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